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HaloTag_ Cloning Starter System

Promega KK / PROMEGA

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Overview

製品説明
HaloTag_ Interchangeable Labeling Technologyは、HaloTag_ タンパク質(またはその融合タンパク質)を哺乳動物細胞で 発現させることにより、生細胞または固定化した細胞内にお けるHaloTag_タンパク質の局在を蛍光でイメージングするこ とのできる新規なツールです。また、発現させた融合タンパ ク質の翻訳後修飾の解析やタンパク質/タンパク質複合体の単 離などにも使用することができます。 このテクノロジーでは、HaloTag_発現ベクターにコードされ ている特殊なHaloTag_タンパク質が受け皿となり、後で添加 するHaloTag_リガンドと特異的に共有結合します。この結合 (標識)は細胞内、溶液中または固相上で速やかに形成され、 実質的に不可逆性であるため厳しい実験条件下でも安定で す。また、このHaloTag_タンパク質(バクテリアhaloalkane dehalogenase由来)は哺乳動物細胞には内在しないため、 バックグラウンドはほとんどありません。 リガンドには様々な機能を携行することができ、現在提供し ているリガンドとして、迅速に細胞膜を透過する赤、緑、青 の蛍光リガンド、非透過性の緑色蛍光リガンドおよび透過性 の異なる2種類のビオチンリガンドがあります。任意のリガ ンドを作製していただくために標識が容易な未標識リガンド も用意しています。すぐに実験が行えるようにヒトORFをクローニングした数千のHaloTag_ ORFクローンコレクション を揃えています。また、ご自身でクローニングするために簡 便なFlexi_クローニングシステムを採用したFlexi HaloTag_ Vectorおよび新しく追加された標準的な制限酵素サイトを 複数利用できるpHTCおよびpHTNベクターもございます (HaloTag_とHisタグがタンデムに並んだ発現ベクターも新 登場)。

Explanation

特長
・ 1つのコンストラクトに対して多様な標識が可能: リガンドを変えるだけで、新たに発現用のコンストラクトを作らずに新たな機能を発揮(多色イメージング〜精製)
・ 強力な結合: HaloTag_タンパク質は共有結合によりHaloTag_リガンドで標識されるため、細胞の固定処理や非特異的結合物除去のための強い洗浄操作が行え、SDS-PAGEや質量分析にも使用可能。
・ 細胞内外で標識: 蛍光リガンドであるHaloTag_ TMR, Oregon Green_, diAcFAMおよび Coumarin Ligandは細胞膜透過性で細胞内のHaloTag_融合タンパク質の標識に使用します。 HaloTag_ Alexa Fluor_ 488 および 660 Ligandは細胞内に透過しないため、細胞表面に提示されるHaloTag_融合タンパク質の標識やin vitro標識に使用することができます。未結合のリガンドは簡単な洗浄で排除でき、バックグラウンドはほとんどありません。また、細胞毒性も最低レベルです。
・ 融合タンパク質の捕捉: ビオチンリガンドとアビジン粒子による間接的捕捉、HaloLinkェによる直接的捕捉
用途
イメージング
・生細胞:タンパク質の局在・動態観察、時間差標識によるパルスチェイス
・固定細胞:固定後も蛍光を維持し、免疫染色との併用も可能
・多重染色:蛍光タンパク質や免疫染色との併用によるマルチカラーイメージング
・ゲル分析:蛍光標識したタンパク質は抗体を用いずにそのままゲルイメージング
キャプチャー
・タンパク質間相互作用:プルダウン,ChIP法
・酵素活性測定:HaloLink™ Resinで単離した融合タンパク質の活性測定
・精製:新しいHaloTag_ 7との融合タンパク質はTEVプロテアーゼによるタグの除去が可能
※ベクター・リガンド購入における注意点:HaloTag_ Technologyで使用するリガンドをプロメガ以外で作製・入手する場合、または研究用途以外でご使用される場合、ライセンス契約の必要があります。詳細については弊社までご連絡ください (www.promega.co.jp/license/)。
Update:2015-08-20

Spec sheet

Cat. No. G6050
Unit Size 1 システム
Size
Price(JPY) 61,000

©2013 KEYSTONE, co. ltd.Privacy Policy

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